Z-ARG-LEU-ARG-GLY-GLY-AMC CAS 167698-69-3

Gyakran használják peptid szubsztrátként a SARS{0}}CoV PLpro (súlyos akut légzőszervi szindróma Coronavirus papaya like Protease) esetén. A SARS-A CoV egy koronavírus, amelynek PLpro-ja kulcsenzim a vírusreplikációs folyamatban, részt vesz a vírus polimer fehérjéinek feldolgozásában. Ezért fontos alkalmazási értéke van a SARS-CoV replikációs mechanizmusának tanulmányozásában, a vírusellenes gyógyszerek szűrésében és a vakcinák fejlesztésében.

Fluoreszcens szondaként is szolgálhat biológiai képalkotáshoz és sejtlokalizációs kutatásokhoz. Az AMC (amino-metil-kumarin) csoport jelenléte miatt ez a peptid fluoreszcens tulajdonságokat mutat, és gerjesztés hatására fluoreszcenciát bocsáthat ki. Ez lehetővé teszi a sejtekben és szövetekben specifikus molekulák vagy struktúrák jelölését, ezáltal feltárva a biológiai folyamatok dinamikus változásait.

Nagy{0}}áteresztőképességű inhibitorok szűrésére és folyamatos elemzésre is használható. A gyógyszerfejlesztés során kulcsfontosságú olyan vegyületeket találni, amelyek hatékonyan gátolják bizonyos enzimek vagy fehérjék aktivitását. A PLpro peptid szubsztrátjaként használható potenciális inhibitorokkal együtt, hogy értékeljék azok aktivitását a szubsztrát hidrolízis sebességében bekövetkezett változások mérésével. Ennek a módszernek az előnyei a nagy áteresztőképesség, a nagy érzékenység és a nagy specifitás, amelyek nagymértékben felgyorsíthatják a gyógyszerszűrés folyamatát.

Emellett immunológiai kutatásokban is alkalmazható. A peptid anyagok fontos szerepet játszanak az immunrendszerben, és antigének vagy antitestekként részt vehetnek az immunválaszban. A Z-ARG-LEU-ARG-GLY-AMC specifikus szekvenciája és szerkezete immunogenitást vagy immunreaktivitást adhat neki, így alkalmas antitestek, vakcinák vagy immundiagnosztikai reagensek előállítására.

A PLpro felelős a vírus poliprotein feldolgozásáért és a gazdaszervezet immunszökéséért, és a vírusellenes gyógyszerek kulcsfontosságú célpontja. A Z-LRGG-AMC, mint PLpro-specifikus szubsztrátum, több mint háromszor nagyobb hasítási hatékonysággal rendelkezik, mint a hagyományos hordozók, például a Z-Gly-Gly Arg AMC. A gyógyszerszűrés során a potenciális vírusellenes szerek gyorsan azonosíthatók a Z-LRGG-AMC PLpro-hasításának gátlásának mértékével.

For example, a study used this substrate to screen candidate molecules with inhibition rate>90%-a egy 100 000 vegyületet tartalmazó könyvtárból, amely kulcsfontosságú támogatást nyújt a vírusellenes gyógyszerek, például a remdesivir fejlesztéséhez. A különböző PLpro vírustörzsek vágási hatékonyságának összehasonlításával Z-LRGG-AMC-n, feltárható a vírusvariáció hatása a proteázaktivitásra. Például a SARS-CoV-2 PLpro vágási sebessége Z-LRGG-AMC-n 1,5-szer gyorsabb, mint a SARS-CoV PLpro esetében, ami arra utal, hogy erősebb gazdaszervezet immunszabályozó képessége lehet.

Az IPaseT és más DUB-ok az ubiquitin C-terminális szekvenciájának hasításával szabályozzák a fehérje lebontását. A Z-LRGG-AMC az ubiquitin C--terminális szerkezetét szimulálja, 18 M⁻¹ s⁻¹ kcat/Km értékkel, így ideális szubsztrátum a DUB kinetikájának tanulmányozásához. Például a rákkutatásban a fehérjehomeosztázis egyensúlyhiánya és a tumor progressziója közötti összefüggést úgy lehet értékelni, hogy kimutatjuk a DUB hasítási aktivitását a Z-LRGG-AMC-n tumorsejtekben.

A fluoreszcens rezonancia energiatranszfer (FRET) technológiával kombinálva a Z-LRGG-AMC felhasználható az intracelluláris ubikvitinációs módosulási folyamatok valós idejű-követésére. Például egy neurodegeneratív betegségmodellben az alfa szinuklein ubiquitináció szintjének kimutatása feltárja az összefüggést az aggregáció és a proteaszóma diszfunkció között.

Egy 384 lyukú lemezen a Z-LRGG-AMC-t összekevertük a vizsgált vegyülettel, és az enziminhibitorokat gyorsan szűrtük fluoreszcencia jelek változásával. Ez a módszer nagy áteresztőképességgel (naponta több ezer vegyület szűrésére képes) és alacsony költséggel (egypórusos költség) rendelkezik<0.1 USD), and has become a standard process for drug development. By changing the substrate concentration, the Km (Michaelis constant) and Vmax (maximum reaction rate) of the enzyme on Z-LRGG-AMC were determined, providing a theoretical basis for inhibitor design. For example, a study used this substrate to determine a Km value of 12 μ M for PLpro, providing key data for optimizing inhibitor affinity.