Iptg porAlkalmazható helyi érzéstelenítő hatás helyére, szóróanyagként alkalmazzák a műtét utáni sebfájdalom és fekélyfájdalom csillapítására-. A kék-fehér foltos szűrésben általánosan használt molekuláris biológiai reagensek és az IPTG indukálta fehérjeexpressziót baktériumokban. Az IPTG, teljes nevén izopropil- - D-tiogalaktozid, CAS 367-93-1, molekulaképlete C9H18O5S, molekulatömege 384,37 dalton, kis molekulájú vegyületek közé tartozik. Fehér vagy csaknem fehér por, kevéssé oldódik vízben, de jobban oldódik szerves oldószerekben. A molekulákban ionos csoportok vannak, így vízben bizonyos fokú vezetőképességgel rendelkeznek. Szobahőmérsékleten stabil, de könnyen lebomlik magas hőmérsékleten vagy erős savas és lúgos körülmények között. Nincs nyilvánvaló szag, de használat közben enyhe szerves vegyület szag keletkezhet. Ez egy gyakran használt induktor, amelyet baktériumokban fehérjeexpresszió indukálására használnak. Az orvosi diagnosztikában az IPTG fluoreszcens próbaként vagy kromogén ágensként szolgálhat specifikus molekulák vagy szövetek kimutatására a mintákban. A célmolekulákkal kombinálva az IPTG fluoreszcens jeleket vagy színváltozásokat generálhat, erős támogatást nyújtva a betegség diagnosztizálásához.
|
Morfológiai |
Kristályos por |
|
Szín |
Fehér |
|
Olvadáspont |
105 fok C |
|
Forráspont |
350,9 ° C ( durva becslés ) |
|
Sűrűség |
1,3329 ( durva becslés ) |
|
Tárolási feltételek |
2-8 C fok |
|
oldhatósági alkohol |
oldható oldható 40 rész oldószer |
|
Savassági együttható ( pKa ) |
13.00 ± 0.70 ( előrejelzett ) |
|
Vízben oldódik |
50 mg/ml |
|
Lobbanáspont |
197,8 fok |
|
Oldhatóság |
1.6g/l |
|
Gőzsűrűség |
5,21 (levegővel szemben) |
|
Törésmutató |
1,5060 (becslés) |
|
|
|
Iptg por,Fizikai paraméterek, Mp. : 114 ~ 121 °C , Használat leírása , Általánosan használt molekuláris biológiai reagensek, általánosan használt kék-fehér szűrés és IPTG-indukált fehérjeexpresszió baktériumokban. , Csomagolási adatok , 1G, 5G, 25G, 100G, 1KG , Tárolási feltételek
2-8 fokos hűtve, fénytől védve , Veszélyességi leírás , Veszélykód : Xi , Kockázati szint : R36 / 37 / 38 , Biztonsági szint : S23-24 / 25-36.
Az IPTG-t általában olyan klónozási kísérletekben használják, amelyeknek -galaktozidáz aktivitást kell indukálniuk. Gyakran használják X-Gal vagy Bluo-Gal kombinációjával a rekombináns baktériumkolóniák kék-fehér szűrésére, amelyet a Chemicalbook indukálhat lac operon expressziójára E. coliban. Az IPTG a lacI represszor fehérjéhez kötődik, és megváltoztatja annak konformációját, hogy megakadályozza a -galaktozidáz által kódolt lacZ gén gátlását.
Az IPTG, teljes nevén izopropil- -D-tiogalaktozid egy általánosan használt induktor, amelyet széles körben használnak fehérjeexpresszió indukálására és szabályozására. Egyedülálló szerkezete és funkciója miatt az IPTG-t általában felhasználásával készítikIptg porszintézis módszerek laboratóriumban.
Szintetikus útvonal
1. Glikozid szintézis:
Első szintézis A -D--tiogalaktozidot általában a glikozid szintézis módszerével állítják elő, a galaktóz megfelelő bázisokkal (például izopropil) való kondenzálásával. Ez a lépés védőcsoportok használatát igényli, hogy elkerüljük a melléktermékek képződését a következő reakciókban.
2. Foszforilezési reakció:
A glikozidszintézis alapján foszfátcsoportokat vezetnek be foszforilációs reakcióval, így izopropilcsoport-- -D-tiogalaktozid-5'-foszfát-észtert kapnak. Ez a lépés foszfátok és megfelelő anhidridek vagy savak alkalmazását igényli.
3. Védőcsoport:
A védőcsoport-eltávolítási reakcióval a glikozidban lévő védőcsoportot eltávolítják, így a célterméket izopropil-- -D--tiogalaktozidot kapják. Ehhez a lépéshez sav- vagy lúgoldat szükséges a reakció elősegítésére.
Kísérleti lépések:
Reagensek és műszerek előkészítése:
Készítse elő a szükséges cukrokat, bázisokat, védőcsoportokat, foszfátokat, anhidrideket vagy savakat, oldószereket és egyéb reagenseket, valamint a szükséges kísérleti eszközöket, mint például keverők, hőmérők, spektrofotométerek stb.
A glikozidok szintézise:
Melegítsük és keverjük össze a galaktózt a megfelelő bázisokkal egy oldószerben, adjunk hozzá katalizátort, és segítsük elő a kondenzációs reakciót. Ez a lépés a hőmérséklet és a keverési idő szigorú szabályozását igényli, hogy biztosítsa a reakció zökkenőmentes lefolyását.
Foszforilezési reakció:
A szintetizált glikozidokat felmelegítjük és foszfáttal, anhidriddel vagy savval oldószerben keverjük, majd katalizátort adunk hozzá a foszforilációs reakció elősegítésére. Ez a lépés a hőmérséklet és a keverési idő szabályozását igényli, miközben ügyelni kell az oldószer polaritására és adagolására, hogy biztosítsuk a reakció előrehaladását és a termék képződését.
Védelem eltávolítási csoport:
Távolítsa el a védőcsoportot a foszforilációs termékről savas vagy lúgos oldatban, hogy megkapja a célterméket, az izopropil- - D-tiogalaktozidot. Ez a lépés megköveteli a pH-érték és a hőmérséklet szabályozását, miközben ügyelni kell az oldószer polaritására és adagolására, hogy biztosítsuk a reakció előrehaladását és a termék képződését.
Elválasztás és tisztítás:
A célterméket oszlopkromatográfiával, átkristályosítással és más elválasztási és tisztítási módszerekkel választják el a reakcióelegytől. Ez a lépés figyelmet igényel az üzemi körülményekre, mint például a hőmérséklet, az oldószer adagolása, az áramlási sebesség stb., hogy biztosítsák a termék tisztaságát és hozamát.
Elemzés és azonosítás:
A céltermék szerkezeti azonosítása analitikai módszerekkel, például magmágneses rezonancia és tömegspektrometria segítségével történik. Ehhez a lépéshez megfelelő műszerek, berendezések és műszaki eszközök használata szükséges a termék szerkezetének és tisztaságának igazolására.
Iptg porteljes nevén izopropil- - D-tiogalaktozid egy általánosan használt induktor, amelyet széles körben használnak fehérjeexpresszió indukálására és szabályozására.
1. Fehérje expresszió indukciója:
Az IPTG fontos szerepet játszik a fehérje expresszió indukciójában. Ez egy széles körben használt induktor, amely hatékonyan képes specifikus gének expresszióját indukálni baktériumokban, ezáltal rövid időn belül megkapja a kívánt célfehérjét. Hatásmechanizmusa, hogy kötődik a baktériumok lacI génjéhez, gátolja annak transzkripciót szabályozó fehérjéjének aktivitását, ezáltal megnyitja a baktériumok lac operonját és beindítja a célgének expresszióját. Ha a fehérje expressziójához laktózoperonokat használunk promóterként, induktorokra van szükség, és az IPTG laktózanalógként működhet a galaktozidáz expressziójának indukálására Escherichia coliban. A sejtek nem tudják felhasználni tartós expresszió elérésére. Az IPTG a lac |-hoz kötődik termékek, konformációs változásokat okozva a lacO-tól távol, ezáltal aktiválva a transzkripciót. Ez az indukálható transzkripciós szabályozás az E. coli expressziós rendszer vektorok felépítésének általánosan használt elemévé vált.
2. Génexpresszió szabályozása:
Az IPTG fontos szerepet játszik a génexpresszió szabályozásában. Fontos kísérleti reagensként fontos szerepet játszik a génexpresszió szabályozásában és a fehérje túlexpressziós kísérletekben. Az IPTG addíciós idejének és koncentrációjának szabályozásával a célfehérje expresszió szabályozása érhető el. Ez a szabályozó hatás az IPTG lac |-hoz való kötődésén alapul termékek a laktóz operonokban, megváltoztatják azok konformációját, ezáltal elhagyják a lacO-t és tovább aktiválják a transzkripciót. Ez az indukálható transzkripciós szabályozási mechanizmus teszi az IPTG-t nagy jelentőségűvé olyan kutatási területeken, mint a génfunkciók, a fehérjekölcsönhatások és a gyógyszerszűrés.
3. Fehérje kristályosítás:
A fehérjekristályosítási kísérletekben az IPTG-t induktorként használják a fehérjekristályosodás elősegítésére. Hatásmechanizmusa, hogy a fehérjék hidrofób régióihoz kötődve megváltoztatja a fehérjék konformációját, elősegítve ezzel a fehérjemolekulák közötti aggregációt és kristályosodást. Ez az aggregációs és kristályosodási folyamat reverzibilis, így IPTG hozzáadásával fehérjekristályosodás indukálható, vagy az IPTG eltávolításával a fehérjekristályok feloldhatók.
A fehérjekristályosítási kísérletekben az IPTG-t általában 1 mM végső koncentrációban adják a fehérjeoldathoz. Ez az alacsony IPTG koncentráció elkerülheti a fehérjék túlzott indukcióját, ezáltal jobb kristályosodási hatást érhet el. Ugyanakkor az IPTG molekuláris chaperonként is szolgálhat, amely elősegíti a fehérjék helyes feltekeredését és aggregációját, ezáltal egységesebb fehérjekristályokat kap.
Megjegyzendő, hogy az IPTG nem minden esetben segíti elő a fehérje kristályosodását. Egyes fehérjék nem érzékenyek az IPTG-re, illetve saját szerkezetük és kristályosításra alkalmatlan tulajdonságaik miatt a különböző fehérjéknél kísérleti validációra és optimalizálásra van szükség az optimális kristályosítási körülmények és módszerek meghatározásához.
Mellékhatások
Citotoxicitás
Toxicitás prokarióta sejtekre
Bár az IPTG-t gyakran használják génexpresszió indukálására prokarióta sejtekben, az IPTG magas koncentrációja toxikus hatással lehet a prokarióta sejtekre. A kutatások kimutatták, hogy ha az IPTG koncentrációja túl magas, az megzavarhatja a sejten belüli normál anyagcsere-folyamatokat. Például befolyásolhatja a sejtek energiaanyagcseréjét, megzavarhatja az olyan utakat, mint a glikolízis és a trikarbonsavciklus, ami az intracelluláris ATP-termelés csökkenéséhez vezethet, és befolyásolhatja a sejtek növekedését és proliferációját. Emellett az IPTG nagy koncentrációja károsíthatja a sejtmembrán integritását, növelheti annak permeabilitását, intracelluláris anyagok kiszivárgásához vezethet, és az extracelluláris környezetből káros anyagokat engedhet be a sejtbe, ezáltal sejthalált okozhat. A kísérletek azt találták, hogy ha az Escherichia colit magas IPTG-koncentrációt tartalmazó tápközegben tenyésztik, a baktériumok növekedési sebessége jelentősen lelassul, és a tenyésztési idő meghosszabbodásával fokozatosan csökken az életképes baktériumok száma. Ez azt jelzi, hogy az IPTG nagy koncentrációi bizonyos gátló és ölő hatással bírnak az Escherichia colira.
Toxicitás eukarióta sejtekre
A prokarióta sejtek mellett az IPTG az eukarióta sejtekre is toxikus lehet. Vannak bizonyos különbségek az eukarióta sejtek és a prokarióta sejtek szerkezetében és működésében, de az IPTG különböző útvonalakon keresztül továbbra is befolyásolhatja az eukarióta sejtek normális élettani funkcióit. Egyrészt az IPTG zavarhatja az eukarióta sejtekben zajló jelátviteli útvonalakat. A sejten belüli jelátvitel kulcsfontosságú szabályozó szerepet játszik olyan folyamatokban, mint a növekedés, a differenciálódás és az apoptózis. Az IPTG megváltoztathatja a jelátvitel intenzitását és irányát azáltal, hogy kölcsönhatásba lép bizonyos jelzőmolekulákkal a sejten belül, ezáltal befolyásolva a sejtek normál fiziológiai aktivitását.
Toxicitás eukarióta sejtekre
Másrészt az IPTG oxidatív stresszválaszt indukálhat az eukarióta sejtekben. Az oxidatív stressz az intracelluláris oxidáció és az antioxidáns aktivitás közötti egyensúlyhiányra utal, ami a reaktív oxigénfajták (ROS) termelésének növekedéséhez vezet. A túlzott ROS megtámadhatja a sejten belüli biomolekulákat, például DNS-t, fehérjéket és lipideket, sejtkárosodást és funkcionális károsodást okozva. A kutatások azt találták, hogy bizonyos körülmények között az eukarióta sejtek IPTG-kezelése jelentősen megnöveli az intracelluláris ROS szintet, ami a sejtek életképességének csökkenésével és az apoptózis sebességének növekedésével jár együtt. Ez arra utal, hogy az IPTG oxidatív stresszválaszt indukálhat, és toxicitást fejthet ki az eukarióta sejteken.
Népszerű tags: iptg por cas 367-93-1, beszállítók, gyártók, gyár, nagykereskedelem, vétel, ár, ömlesztve, eladó