Tiazolilkék CAS 298-93-1

A Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. a tiazolilkék cas 298-93-1 egyik legtapasztaltabb gyártója és szállítója Kínában. Üdvözöljük az ömlesztett, kiváló minőségű tiazolilkék cas 298-93-1 nagykereskedelmi értékesítésében, amelyet gyárunkból értékesítünk. Jó szolgáltatás és elfogadható ár érhető el.

Tiazolil kék, ismertebb nevén MTT (3-(4,5-dimetil-tiazol-2-il)-2,5-difenil-tetrazólium-bromid), lenyűgöző kettősséget rejt magában – a sejtbiológia létfontosságú eszköze és kaméleonikus kémiai furcsaság. Ez a sárga kristályos por megdöbbentő metamorfózison megy keresztül az élő sejtekben: a mitokondriális reduktázok felhasítják tetrazóliumgyűrűjét, és oldhatatlan lila formázán csapadékká alakítják – ez a reakció olyan látványos, hogy a sejtek életképességének mérésének arany standardjává vált. A laborpadon túl azonban az MTT több ezoterikus viselkedést is feltár; kristályos szerkezete sajátos "halszálkás" mintákat képez mikroszkóp alatt, míg redox tulajdonságai lehetővé teszik, hogy meghatározott hullámhosszú fény hatására egzotikus fotokémiai reakciókban vegyen részt. Érdekes módon a vegyület egy ritka jelenséget mutat, amelyet "metakromáziának" neveznek - a koncentrációtól és a molekuláris környezettől függően különböző színek jelennek meg -, ezt a tulajdonságot a textilkémikusok egykor "okos" festékek létrehozására használták ki. A közelmúltban végzett tanulmányok feltárták váratlan szerepét bizonyos légzési lánc enzimek gyenge inhibitoraként, utalva arra, hogy ez a mindenütt jelenlévő vizsgálati reagens finoman befolyásolhatta azokat az anyagcsere-folyamatokat, amelyekben a tudósok tanulmányozzák. Szerves oldószerekben oldva az MTT-oldatok szokatlan fluoreszcens kioltó hatást fejtenek ki, ami zavarba ejtette a fizikai kémikusokat, ami arra utal, hogy bonyolult intermolekuláris kölcsönhatások még mindig teljes magyarázatra várnak.

Tiazolil kék,A kémiai neve 3-(4,5-dimetil-2-tiazol)-2,5-difeniltetrazólium-bromid, rövidítve MTT, amely fontos szerves vegyület. Mióta Mosman 1983-ban először beszámolt az MTT-festésről a sejtnövekedés és a túlélés meghatározására, az MTT-t széles körben alkalmazzák olyan területeken, mint az élettudományok, az orvosi kutatás és a gyógyszerfejlesztés. Az alábbiakban részletesen ismertetjük a célját:

Alkalmazás a sejtbiológiai kutatásban

 

Az MTT a sejtproliferáció meghatározásának egyik klasszikus módszere. A sejttenyésztés során a dehidrogenázok, mint például a szukcinát-dehidrogenáz az élő sejt mitokondriumában, az exogén MTT-t oldhatatlan kéklila kristályos formazánná redukálhatják, amely lerakódik a sejtben. Az elhalt sejtekből hiányzik ez a redukáló képesség, ezért nem termelnek formazánt. A formazán sejtekben való feloldásával és fényelnyelési értékének meghatározott hullámhosszon (például 490 nm vagy 562 nm) mérésével egy enzimhez kötött immunszorbens assay (ELISA) olvasó segítségével az élő sejtek száma közvetetten visszaverhető. A sejtszám egy bizonyos tartományán belül a képződött MTT kristályok mennyisége arányos a sejtek számával, így a sejtszaporodás a mért abszorbancia érték (OD érték) alapján határozható meg.

Alkalmazás a sejtbiológiai kutatásban

 

Az MTT felhasználható gyógyszerek vagy egyéb kezelési módszerek (például besugárzás) toxicitásának meghatározására is a tenyésztett sejteken in vitro. A kezelt csoport és a kontrollcsoport OD-értékeinek összehasonlításával értékelhető a gyógyszerek vagy kezelési módszerek sejtaktivitásra gyakorolt ​​hatása. Minél nagyobb az OD érték, annál erősebb a sejtaktivitás; Éppen ellenkezőleg, azt jelzi, hogy minél gyengébb a sejtaktivitás vagy annál nagyobb a sejttoxicitás. Ez a módszer széles körben alkalmazható gyógyszerszűrésben, toxikológiai kutatásban és más területeken. Bár az MTT-t elsősorban a sejtproliferáció és a citotoxicitás mérésére használják, bizonyos esetekben a sejtapoptózis tanulmányozásában is segíthet. A sejt apoptózis folyamata során a sejten belüli enzimaktivitás megváltozik, ami befolyásolhatja az MTT redukáló képességét. Az apoptotikus sejtek és a normál sejtek közötti OD-értékek különbségének összehasonlításával előzetesen meghatározható a sejt apoptózis előfordulása. Meg kell azonban jegyezni, hogy az MTT nem egy speciális módszer a sejtapoptózis kimutatására, és eredményeit átfogóan elemezni kell más apoptózis kimutatási módszerekkel együtt.

Alkalmazás a gyógyszerfejlesztésben

 

A gyógyszerfejlesztés folyamatában az MTT-teszt egy általánosan használt nagy{0}}áteresztőképességű gyógyszerszűrési módszer. A vizsgált gyógyszer sejtekkel való együttes inkubálásával és MTT vizsgálattal a sejtaktivitás változásainak mérésére a potenciális aktív gyógyszermolekulák gyorsan szűrhetők. Ennek a módszernek az előnyei a könnyű kezelhetőség, a megbízható eredmények és a nagy áteresztőképesség, valamint fontos alkalmazási értéke van a gyógyszerfejlesztés korai szakaszában. Az MTT assay a gyógyszerek hatásmechanizmusának vizsgálatára is használható. A különböző gyógyszeres kezelési körülmények között a sejtaktivitás változásának összehasonlításával előzetesen meghatározható a gyógyszerek hatása olyan folyamatokra, mint a sejtproliferáció és az apoptózis. Más molekuláris biológiai technikák, például Western blot és áramlási citometria kombinálásával a gyógyszerek célpontjai és jelátviteli útvonalai tovább tárhatók fel. A gyógyszerbiztonsági értékelés során az MTT assay használható a gyógyszerek sejtekre gyakorolt ​​toxikus hatásának felmérésére. A sejtek gyógyszeres kezelés utáni OD-érték-változásainak mérésével megállapítható, hogy a gyógyszer citotoxicitással rendelkezik-e és a toxicitás erőssége. Ennek nagy jelentősége van a preklinikai kutatások és a gyógyszerek klinikai alkalmazásának iránymutatása szempontjából.

Az MTT alkalmazása más területeken

 

Az immunológiai kutatásokban az MTT assay használható a limfociták proliferációs képességének meghatározására. A limfociták antigénekkel vagy immunstimulánsokkal való együttes inkubálásával és a sejtaktivitás változásainak MTT vizsgálattal történő mérésével értékelhető a limfociták immunválasz képessége. Ez a módszer széles körben alkalmazható vakcinafejlesztésben, immunterápiában és más területeken. Az onkológiai kutatásokban az MTT assay segítségével meghatározható a tumorsejtek proliferációs aktivitása és gyógyszerérzékenysége. A daganatsejtek különböző gyógyszeres kezelési körülményei között bekövetkező OD-értékek változásának összehasonlításával kiszűrhetők a daganatsejteket gátló hatású gyógyszermolekulák, és értékelhető daganatellenes hatásuk. Ennek nagy jelentősége van a daganatok klinikai kezelésének iránymutatásában. A környezettoxikológiai kutatásokban az MTT assay felhasználható a környezeti szennyező anyagok sejtre gyakorolt ​​toxikus hatásának értékelésére. A sejtek különböző koncentrációjú szennyező anyagokkal való együttes inkubálásával és a sejtaktivitás változásának MTT assay segítségével történő mérésével meghatározható a szennyező anyagok toxicitása és hatásmechanizmusa. Ennek nagy jelentősége van a környezetszennyező anyagok ökológiai kockázatainak felmérésében és a környezetvédelmi politikák kialakításában. 

Kísérleti lépéseitiazolilkékmódszer:

1: A tripszin emészti a logaritmikus fázisú sejteket, centrifugálja és a befejezés után összegyűjti őket sejtszuszpenzió előállításához, és koncentrációját 5-10-re állítja be a sejtszám × 104/ml értékkel. Kezdőknek a sejteket 5-10 × 104/ml-re kell elérni, gyakran nem tudja, hol kezdje. Azért vagyok itt, hogy egy egyszerű módszert kínáljak a cellák számának kezdeti meghatározására.

Vegyünk például a sejttenyésztéshez általában használt 25 cm2-t:

1) A sejtsűrűség körülbelül 80-90% (az alábbi ábra a sejtek hozzávetőleges állapotát mutatja 80-90%-os sűrűségnél). Emésztés és centrifugálás után távolítsa el a felülúszót, és keverje hozzá 3 ml táptalajt.

2) Vegyünk egy új, 15 ml-es steril centrifugacsövet (a 96 lyukú lemez beoltásának következő lépéséhez), és töltsük meg körülbelül 9 ml táptalajjal.

3) Az első lépésben elkészített 3 ml-es sejtszuszpenzióból vegyünk 1 ml-t, öntsük a felső csőbe, és keverés után számoljuk meg a sejteket. Ebben az időben általában 5-10 vagy kevesebb × 104/ml, ami 5-10 sejt/sejtnek felel meg a sejtszámláló tábla 4 cellájában (lásd az alábbi ábrát); Ha a koncentráció nem elegendő, a sejtszuszpenziót a számlálási eredménynek megfelelően kell hozzáadni, és minden cseppet 50 ul-ként kell kiszámítani.

4) A sejtek számát a kísérlet különböző céljainak megfelelően kell beállítani. Például egy általános sejtproliferációs kísérletben lyukanként 2000 sejt használható (2 × 104/ml sejtszuszpenziósűrűségnek felel meg), üregenként 5000–10 000 sejt (5 × 104/ml sejtszuszpenziósűrűségnek felel meg). Ezenkívül a sejtek számát saját jellemzőik, például a növekedési sebesség szerint is meg kell határozni. Például a gyorsabban növekvő sejtek sűrűsége valamivel kisebb lehet.

2. A sejtszuszpenzió elkészítése után óvatosan keverje össze és adjon 100 ul-t minden lyukba úgy, hogy a vizsgálandó sejtek sűrűsége 5000-10 000/lyuk legyen (a peremlyukat steril PBS-sel töltjük ki).

L Megjegyzés: Mivel a sejtek a keverés után is leülepednek, az oltás során ismételten keverni kell, például minden hatodik lyukban, hogy biztosítsuk, hogy az oltás sejtsűrűsége pontosan azonos legyen a lyukak között, ami kulcsfontosságú az MTT eredményeihez.

3. Tegye a beoltott sejttenyésztő lemezt az inkubátorba a tenyésztéshez, amíg a sejt monoréteget be nem fedi a lyuk alja (96 lyukú lapos lemez), majd adjuk hozzá a hatóanyagot koncentráció-gradienssel. A gyógyszert elvileg a sejt falra rögzítése után, vagy két óra, fél nap után lehet adagolni, de gyakran előző nap délután, másnap reggel adjuk hozzá a gyógyszert. Általában 5-7 gradiens, 100 ul lyukonként és 3-5 több lyuk van beállítva. Javasoljuk a 6-os beállítást, különben nehéz a valós helyzetet tükrözni. A következő ábra referencia lépésként használható a 96 lyukú lemezhez.

L Az adagoláshoz egyesek közvetlenül adnak gyógyszert 96 lyukú lemezekhez különböző térfogatban, hogy koncentrációgradiens alakuljon ki. De szerintem meg kell próbálnunk az EP csőben különböző koncentrációjú gyógyszereket keverni, majd a 96 lyukú lemezről eltávolítani a tenyészet felülúszóját (ami kisütőpisztollyal leszívható) és hozzáadni 100 ul különböző koncentrációjú gyógyszert tartalmazó táptalajt, amivel biztosítható a gyógyszerkoncentráció pontossága. Ezenkívül meg kell jegyezni, hogy ha ezt a módszert alkalmazzák, ne szívja fel az összes 96 lyukú lemeztenyésztő oldatot a gyógyszer hozzáadása előtt. A 96 lyukú lemez kiszáradása miatti sejtpusztulás elkerülése érdekében azonnal adjon mintát, miután felszívta egy részét.

Inkubáljuk 4,5%-os CO2-vel 37 fokon 16-48 órán keresztül, majd fordított mikroszkóp alatt figyeljük meg a gyógyszer hatását. A következő ábra a citotoxicitás tipikus gyógyszergradiensét mutatja.

4. Adjon 10 ul MTT oldatot (5 mg/ml, azaz . 0.5% MTT) minden egyes lyukba, és folytassa a tenyésztést 4 órán keresztül. Ha a gyógyszer reagálhattiazolilkéka tenyészoldatot centrifugálás után eldobhatjuk, és az MTT-t tartalmazó tenyészoldatot 2-3 PBS-es mosás után adhatjuk hozzá.

5. Állítsa le a tenyésztést, és készítse elő az oldódást és a kristályosodást.

Tiazolil kék, melynek kínai neve Methyl Blue, egy fontos szerves vegyület, amelyet széles körben használnak az orvostudományban, a biológiában és a kémiában. az orvostudományban gyakran használják nitritmérgezések, cianidmérgezések stb. kezelésére, valamint egyes betegségek diagnosztizálására és adjuváns kezelésére is használják; Biológiai kutatásokban festőanyagként használható sejtek vagy szövetek jelölésére. Sok gyógyszerhez hasonlóan azonban a metilénkék is számos mellékhatást okozhat a használat során:

Az emésztőrendszer mellékhatásai

A hányinger és a hányás a metilénkék egyik gyakori emésztőrendszeri mellékhatása. Amikor a metilénkék a szervezetbe kerül, stimulálhatja a gyomor-bélrendszer nyálkahártyáját, súlyos esetekben hányingert, sőt hányást is okozhat. Ez a tünet kifejezettebb, ha az intravénás injekció túl gyors vagy az adag túl nagy. Például egyes klinikai esetekben a betegek jelentős hányingert és hányást tapasztalhatnak röviddel a metilénkék gyors intravénás injekciója után, ami befolyásolja kényelmüket és kezelési élményüket. Egyes betegek hasi fájdalmat tapasztalhatnak a metilénkék használata után, és a fájdalom mértéke az egyéni különbségek függvényében változhat, az enyhe kényelmetlenségtől a súlyosabb fájdalomig.

Ugyanakkor hasmenéssel is járhat, ami a metilénkéknek a bélperisztaltikára és az emésztőrendszer működésére gyakorolt ​​interferenciájának tudható be, ami a bélrendszer rendellenes mozgásához és az emésztőfolyadék elválasztásának megváltozásához vezethet. A hasi fájdalom és hasmenés hosszú távú vagy gyakori előfordulása nemcsak a beteg egészségi állapotát befolyásolja, hanem egyéb tápanyag-felszívódást, felszívódást is okozhat.

A húgyúti rendszer mellékhatásai

A metilénkék használata után a vizelet színe kékre változik, amit a metilénkék és metabolitjainak a vesén keresztül a vizeletbe történő kiválasztódása okoz. Általában a vizelet színének ez a változása átmeneti, és nincs komoly hatással a fizikai egészségre. De bizonyos speciális esetekben, például húgyúti betegségben szenvedő betegeknél, a vizelet színének megváltozása zavarhatja a betegség diagnosztizálását, és az orvosoknak átfogó elemzést kell végezniük más vizsgálati mutatók alapján. A vizelés során egyes betegek szúró érzést érezhetnek a húgycső nyílásánál.

 

Ennek oka lehet a metilénkék húgycső nyálkahártyára gyakorolt ​​serkentő hatása, különösen ha magas a vizelet koncentrációja, vagy vizelés közben dörzsöljük a húgycső nyálkahártyáját, a szúró érzés erősebb lesz. Ez a tünet bizonyos kényelmetlenséget okozhat a betegeknek, és befolyásolhatja mindennapi életét.

Neurológiai mellékhatások

A szédülés és a fejfájás a metilénkék gyakori neurológiai mellékhatásai. A metilénkék használata után a betegek szédülést és tájékozódási zavart érezhetnek a fejükben, vagy kellemetlen érzést tapasztalhatnak, például duzzanatot és fájdalmat a fejben. Ez a tünet befolyásolhatja a páciens figyelmét és gondolkodási képességét, valamint csökkentheti a munka és az élet hatékonyságát. A szédülés és fejfájás előfordulása összefügghet a metilénkék agyi erekre és idegekre gyakorolt ​​hatásával, és a konkrét mechanizmus még további kutatásokat igényel. Ritka esetekben a metilénkék tudatzavarokat, például álmosságot, kómát stb.

Ennek oka általában a metilénkék túlzott használata vagy a betegek túlérzékenysége a gyógyszerre, ami a központi idegrendszer súlyos gátlását okozza. A tudatzavar súlyos mellékhatás, amely veszélyeztetheti a beteg életét, és azonnali mentőkezelést igényel.

1.Mire használható a tiazolilkék-tetrazólium-bromid?

A tiazolilkék tetrazoliumkék (MTT) a sejtproliferáció mérésére használható. Az MTT sárgás oldatot állít elő, amelyet az élő sejtek mitokondriális dehidrogenázai sötétkék, vízben{1}}oldhatatlan MTT formazánná alakítanak.

2. Biztonságos a tiazolilkék tárolása?

Hőmérséklet: Zárja le a port és tárolja hűtőszekrényben -20 fokon fagyasztásig, ami hatékonyan meghosszabbíthatja az eltarthatósági időt (általában 1-2 év); rövid távú tárolásra (1 hónapon belül), 4 fokos hűtési körülmények között átmenetileg eltartható.

Fény- és nedvességálló-követelmények: Az MTT por fényérzékeny, Eközben szárítószert (pl. szilikagél) kell hozzáadni, hogy a por ne szívja fel a nedvességet és csomósodjon.

3.Megváltozik a tiazolilkék színe?

Ha az oldat kék lila csapadékot mutat vagy elsötétül, az azt jelzi, hogy oxidálódott és nem használható tovább.
Kerülje az oldat szobahőmérsékletű vagy világos környezetbe helyezését, mert gyorsan meghibásodhat.

Népszerű tags: tiazolilkék cas 298-93-1, beszállítók, gyártók, gyár, nagykereskedelem, vétel, ár, ömlesztve, eladó