Retatrutide(link:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptide/retatrutide-powder-cas-2381089-83-2.html) egy kémiailag szintetizált, hosszú hatású GLP-1R/GIPR/GCGR polipeptid agonista, amelyet felnőttkori 2-es típusú cukorbetegség, testtömeg-szabályozás és nem alkoholos zsírmáj/nem alkoholos steatohepatitis kezelésére szánnak. Ennek a terméknek a 2-es típusú cukorbetegség felnőttkori javallatát 2023. augusztus 29-én hagyták jóvá klinikai használatra. Ezenkívül a nem alkoholos zsírmáj/nem alkoholos steatohepatitis indikációira vonatkozó klinikai regisztráció iránti kérelem a végső felülvizsgálati szakaszban van. Nyolc GLP-1R/GIPR/GCGR agonista van fejlesztés alatt a világon, amelyek közül a Rita's Retatrutide érte el a leggyorsabban, és ez év júniusában elindította a harmadik fázisú klinikai vizsgálatot. Ugyanebben a hónapban Rita bejelentette, hogy az ADA éves ülésén nyilvánosságra hozták a retatrutide második fázisának kutatási adatait, amelyek azt mutatják, hogy a 24. héten a retatrutide (1 mg, 4 mg, 8 mg vagy 12 mg) elérte a hatékonyság fő végpontját. értékelés az elhízott vagy túlsúlyos résztvevők esetében, akiknek nincs cukorbetegségük, átlagosan 17,5%-os súlycsökkenéssel. A másodlagos végpontok közül átlagosan 24,2%-os súlycsökkenést értek el a 48 hetes kezelés végén. A peptidet a publikált módszer alapján laboratóriumban is szintetizáltuk. A konkrét szintézis módszert röviden ismertetjük, a konkrét lépéseket pedig e-mailben elküldhetjük nekünk.
1. módszer:
A Retarutide szilárdtestszintézissel történő laboratóriumi szintézisének részletes lépései a következők:
Készítse elő a szükséges reagenseket és eszközöket: beleértve az aminosavakat, diklór-metánt, kálium-karbonátot, etoxilezett szilikagélt, acetonitrilt, piridint, N-metilmorfolint, diizopropil-etil-klorid forrást, trifluor-ecetsavat, DIPEA-t, Boc védett aminosavakat és egyéb mágneses reagenseket, keverőket , rotációs elpárologtatók és egyéb műszerek.
(1) Boc-védett aminosavak szintézise: Oldja fel a szükséges aminosavakat diklór-metánban, adjon hozzá kálium-karbonát port, keverje egyenletesen, adjon hozzá etoxilezett szilikagélt, folytassa a keverést, majd adjon hozzá piridint és N-metilmorfolint, hogy Boc védett aminosavakat kapjon.
(2) Szilárd fázisú szintézis: Keverjük össze az acetonitrilt, a diizopropil-etil-klorid forrást és a trifluor-ecetsavat, egyenletesen keverjük össze, adjunk hozzá előkészített Boc-védett aminosavakat, és folytassuk a keverést, hogy megkapjuk a szilárd fázisú szintézis terméket.
(3) Védőcsoport eltávolítása: Oldjuk fel a szilárd fázisú szintézist diklór-metánban, adjunk hozzá trifluor-ecetsavat, keverjük egyenletesen, majd adjunk hozzá DIPEA-t. Folytatjuk a keverést, hogy megkapjuk a védőcsoport-mentesített szilárd fázisú szintézist.
(4) Tisztítás: Oldja fel a védőcsoport nélküli szilárd fázisú szintézist vízben, állítsa be a pH-t 9.0 körüli értékre nátrium-hidroxid-oldattal, majd állítsa be a pH-t 5.0 körüli értékre ecetsavval, végül a tiszta terméket éterrel kicsapjuk.
2. módszer:
A Retarutide folyékony fázisú szintézissel történő laboratóriumi szintézisének részletes lépései a következők:
Készítse elő a szükséges reagenseket és eszközöket: beleértve az arginint, glicint, ecetsavanhidridet, trietil-amint, kálium-karbonátot, diklór-metánt, metanolt, piridint, N-metilmorfolint, ecetsavanhidridet, nátrium-acetátot és egyéb reagenseket, valamint eszközöket, például keverőket, választótölcsért vákuumszivattyúk, kemencék és kromatográfiás oszlopok.
(1) Oldjuk fel az arginint és a glicint megfelelő mennyiségű diklór-metánban, adjunk hozzá megfelelő mennyiségű ecetsavanhidridet és trietil-amint, és keverjük egyenletesen keverővel.
(2) Tegye át az oldott keveréket egy kemencébe, és melegítse 80 °C-on 1 órán át az aminosavmaradékok acetilezéséhez.
(3) Semlegesítse a reagált oldatot kálium-karbonát porral, hogy semlegesítse az ecetsavat az oldatban, így nátrium-acetát képződik, majd a keletkezett peptidet diklór-metánnal extrahálja.
(4) Az extrahált peptidoldatot metanollal mossuk, és vákuumszivattyúval szűrjük, így nyers peptidet kapunk.
(5) Oldjuk fel a nyers peptidet megfelelő mennyiségű piridinben és N-metil-morfolinban, adjunk hozzá megfelelő mennyiségű ecetsavanhidridet és nátrium-acetátot, és keverjük egyenletesen keverővel.
(5) Szűrje le a reagált oldatot vákuumszivattyúval, mossa át a szűrőpogácsát metanollal, majd szűrje le vákuumszivattyúval, hogy megkapja a végső Restarutide-ot.
3. módszer:
A Retarutide laboratóriumi kémiai módszerekkel történő szintetizálásának részletes lépései a következők:
Készítse elő a szükséges reagenseket és eszközöket: beleértve az arginint, glicint, ecetsavanhidridet, trietil-amint, kálium-karbonátot, diklór-metánt, metanolt, piridint, N-metilmorfolint, ecetsavanhidridet, nátrium-acetátot és egyéb reagenseket, valamint eszközöket, például keverőket, választótölcsért vákuumszivattyúk, kemencék és kromatográfiás oszlopok.
(1) Oldjuk fel az arginint és a glicint megfelelő mennyiségű diklór-metánban, adjunk hozzá megfelelő mennyiségű ecetsavanhidridet és trietil-amint, és keverjük egyenletesen keverővel.
(2) Tegye át az oldott keveréket egy kemencébe, és melegítse 80 °C-on 1 órán át az aminosavmaradékok acetilezéséhez.
(3) Semlegesítse a reagált oldatot kálium-karbonát porral, hogy semlegesítse az ecetsavat az oldatban, így nátrium-acetát képződik, majd a keletkezett peptidet diklór-metánnal extrahálja.
(4) Az extrahált peptidoldatot metanollal mossuk, és vákuumszivattyúval szűrjük, így nyers peptidet kapunk.
(5) Oldjuk fel a nyers peptidet megfelelő mennyiségű piridinben és N-metil-morfolinban, adjunk hozzá megfelelő mennyiségű ecetsavanhidridet és nátrium-acetátot, és keverjük egyenletesen keverővel.
(6) Szűrje le a reagált oldatot vákuumszivattyúval, mossa át a szűrőpogácsát metanollal, majd szűrje le vákuumszivattyúval, hogy megkapja a végső Restarutide-ot.
A célmolekula előállításához több szerves szintézis reakcióra van szükség. Ezen túlmenően ez a módszer több szerves reagenst és összetett működési feltételeket használ, így a Rotarutide laboratóriumi kémiai szintézise általában nem alkalmas nagyüzemi gyártásra vagy ipari alkalmazásokra. Nagyüzemi vagy ipari alkalmazásokhoz a Rotarutide előállítása a leggyakrabban alkalmazott módszer olyan szintézis módszerekkel, mint a bioszintézis vagy folyadékfázisú szintézis, amelyek viszonylag kis laboratóriumi méretűek, viszonylag egyszerűek a működésükben és alkalmasak kis mennyiségű termék előállítására. . Az ezekkel a módszerekkel kapott Retarutide szerkezetében és biológiai aktivitásában hasonló vagy hasonló a kémiai módszerekkel szintetizált Retarutidehoz, de előnye a nagyobb hozam és a könnyebb előállítás. Ugyanakkor jobb iparosítási potenciállal és szélesebb alkalmazási kilátásokkal is rendelkeznek.
4. módszer:
A Retarutide laboratóriumi biológiai módszerekkel történő szintetizálásának részletes lépései a következők:
A szükséges gének és reagensek előkészítése: Szerezze be a Retatrutide gént tartalmazó plazmidokat a génkönyvtárból, transzformálja a plazmidokat recipiens sejtekkel (például Escherichia coli), és szerezzen be a Retatrutide gént tartalmazó mérnöki baktériumokat.
(1) Műszaki baktériumok tenyésztése: Megfelelő hőmérséklet, pH és ionkoncentráció mellett használjon táptalajt a mérnöki baktériumok tenyésztéséhez, lehetővé téve számukra, hogy nagy mennyiségben szaporodjanak.
(2) A Retarutide extrahálása: A tenyésztett mérnöki baktériumokat aprítógép segítségével összetörik, és a sejtfragmenseket elválasztják a Retarutide-tól olyan módszerekkel, mint az ultraszűrés és az ülepítés, így nyersterméket kapnak.
(3) A Retarutide tisztítása: A nyers Retarutidot kromatográfiás technológia alkalmazásával tisztítjuk, így nagy tisztaságú Retarutidot kapunk.
A Rotarutide kimutatása és azonosítása: Használjon nagy teljesítményű folyadékkromatográfiát, tömegspektrometriát, mágneses magrezonanciát és egyéb technikákat a tisztított Rotarutide szerkezetének kimutatására és azonosítására.
A Retarutide laboratóriumi biológiai szintézisének kémiai reakcióegyenlete főként a génexpressziós folyamat során lezajló kémiai reakciókat foglalja magában, beleértve a két lépést: a transzkripciót és a transzlációt.
Transzkripció: A kettős szálú DNS megnyílik, az egyik szálat templátként használva RNS-szálak szintetizálásához, amihez az RNS polimeráz bevonása szükséges. A reakcióegyenlet a következő:
DNS kétszálú: DNApol → mRNS+DNApol
Fordítás: A riboszómák az mRNS-hez kötődnek, hogy peptidláncokat szintetizáljanak, ez a folyamat aminosavak és energia részvételét igényli. A reakcióegyenlet a következő:
Riboszóma+mRNS → Peptidlánc+GDP+Pi+H2O
Peptidlánc+ATP → Peptidlánc+AMP+PPi
Ezek közül a DNApol a DNS-polimeráz; Az MRNA hírvivő RNS-t jelent; A riboszómák riboszómákat jelentenek; A peptidláncok polipeptidláncokat jelentenek; A GDP a guanozin-difoszfátot jelenti; Pi jelentése szervetlen foszforsav; H2O jelentése víz; Az ATP jelentése adenozin-trifoszfát; AMP jelentése adenozin-monofoszfát; A PPi szervetlen pirofoszfátot jelent. Ezek a reakciók létrehozzák a Retarutide szintéziséhez szükséges peptidláncokat, amelyeket azután feldolgoznak és módosítanak a későbbi szakaszokban a Retarutide előállításához.
A fentiek a Rotarutide laboratóriumi szintézisének általános módszerei, amelyek mindegyike eltérő előnyökkel, hátrányokkal és alkalmazási körrel rendelkezik. A laboratórium általában folyadékfázisú szintézis és szilárd fázisú szintézis módszereit alkalmazza kisüzemi termeléshez kutatási és kísérleti felhasználásra; Az ipari termelés ezzel szemben a bioszintézis és a folyékony/szilárd fázisú termelés kombinációját alkalmazza a nagyüzemi termelés érdekében, hogy megfeleljen a piaci igényeknek. Megjegyzendő, hogy ezek a módszerek szigorú állapotoptimalizálást és folyamatszabályozást igényelnek a végtermék minőségének és tisztaságának biztosítása érdekében.