Az IPTG vagy izopropil-β-D-1-tiogalaktopiranozid egy jól ismert reagens a molekuláris biológia területén. Mint egyIPTG reagensbeszállítótól, saját bőrömön láttam, hogy ez a kis vegyszer milyen nagy hatással lehet a fehérjekutatásra, különösen, ha a fehérjék transzlációs utólagos módosításáról van szó.
IPTG reagens
Termékkód: BM-2-5-091
Angol név: IPTG
CAS SZÁM: 367-93-1
MF: C9H18O5S
MW: 238,3
EINECS: 206-703-0
Gyártó: BLOOM TECH Wuxi Factory
Analízis: HPLC, LC-MS, HNMR
Fő piac: USA, Ausztrália, Brazília, Japán, Németország, Indonézia, Egyesült Királyság, Új-Zéland, Kanada stb.
Technológiai támogatás: K+F Oszt.-4
biztosítunkIPTG reagens, kérjük, látogassa meg a következő webhelyet a részletes specifikációkért és a termékinformációkért.
Termék:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/api-researching-only/iptg-reagent-cas-367-93-1.html
Mi az a fordítás utáni módosítás?
Mielőtt belemerülnénk abba, hogy az IPTG hogyan befolyásolja a fordítás utáni módosításokat, nézzük meg gyorsan, mi is az a fordítás utáni módosítás. Miután egy fehérjét szintetizálnak az mRNS-ből a transzlációnak nevezett folyamat során, gyakran különböző kémiai módosításokon megy keresztül. Ezek a módosítások megváltoztathatják a fehérje szerkezetét, funkcióját, stabilitását és más molekulákkal való kölcsönhatási képességét. Néhány gyakori poszttranszlációs módosulás a foszforiláció, a glikoziláció, az acetilezés és az ubiquitináció.
Hogyan működik az IPTG a fehérje expressziójában
Az IPTG-t széles körben használják induktorként a rekombináns fehérjék baktériumokban, különösen E. coliban történő expressziójában. Az E. coliban a lac operon olyan gének halmaza, amely részt vesz a laktóz anyagcserében. Normális esetben a lac operon elnyomódik, de amikor IPTG-t adunk a tenyészethez, az a lac represszor fehérjéhez kötődik, ami konformációs változást okoz. Ez a változás felszabadítja a represszort a lac operon operátor régiójából, lehetővé téve az RNS-polimeráz számára, hogy megkösse és átírja a downstream géneket, beleértve a minket érdeklő rekombináns fehérjét kódoló gént is.
Hatás a fordítás utáni módosításra
Foszforilezés
A foszforiláció az egyik legfontosabb poszttranszlációs módosulás. Szabályozhatja a fehérje aktivitását, lokalizációját és kölcsönhatásait. Amikor az IPTG-t fehérjeexpresszió indukálására használják, közvetetten befolyásolhatja a foszforilációt. Például egy fehérje IPTG által indukált túlzott expressziója a sejt kináz-foszfatáz rendszerében egyensúlyhiányhoz vezethet. Egyes kinázokat túlterhelheti a nagy mennyiségű szubsztrát (az újonnan szintetizált fehérje), ami alul- vagy túlfoszforilációhoz vezethet.
Ezenkívül a fehérje túlzott expressziója miatt megnövekedett metabolikus aktivitás a sejtben megváltoztathatja az ATP elérhetőségét, amely a foszforilációs reakciók foszfát donorja. Ez tovább ronthatja az expresszált fehérje normál foszforilációs mintázatát.
Glikoziláció
A glikoziláció szénhidrátcsoportok hozzáadása a fehérjékhez. Az olyan baktériumok, mint az E. coli, amelyeket általában IPTG-vel történő fehérjeexpresszióra használnak, nem rendelkeznek ugyanazzal a glikozilációs mechanizmussal, mint az eukarióta sejtek.
Az IPTG által indukált fehérje expresszió jelenléte azonban továbbra is hatással lehet. A fehérje túlzott expressziója során megnövekedett sejtforrások iránti igény a nukleotid cukrok hiányához vezethet, amelyek a glikoziláció építőkövei. Ez hiányos vagy abnormális glikozilációs mintákat eredményezhet, ha a fehérje potenciális glikozilációs helyekkel rendelkezik.
Acetilezés
Az acetilezés egy másik fontos poszt-transzlációs módosulás, amely befolyásolhatja a fehérje stabilitását és működését. Az IPTG-indukált fehérje expresszió megváltoztathatja az intracelluláris környezetet. Például a fehérjék fokozott termelése megváltoztathatja az acetil-CoA szintjét, amely az acetilezési reakciók acetil donorja. Ha az acetil-CoA szintje kimerül a magas szintű fehérjeexpresszió miatt, az az expresszált fehérje csökkent acetilációjához vezethet.
Esettanulmányok
Nézzünk néhány példát a való világból. Egy tanulmányban a kutatók egy rekombináns humán fehérjét próbáltak expresszálni E. coliban IPTG segítségével. Észrevették, hogy a fehérje foszforilációs mintázata eltér a natív fehérjétől az emberi sejtekben. Az IPTG által kiváltott túlzott expresszió abnormális foszforilációs állapothoz vezetett, ami befolyásolta a fehérje aktivitását.
Egy másik példa a glikozilációhoz kapcsolódik. Amikor egy glikoproteint expresszáltak E. coliban IPTG-vel, az E. coliban a megfelelő glikozilációs gépezet hiánya és az IPTG által kiváltott túlzott expresszió által okozott erőforrás-korlátozások nem funkcionális fehérjét eredményeztek. Az abnormális glikozilációs mintázat megakadályozta, hogy a fehérje megfelelően hajtogassa össze és kölcsönhatásba lépjen a célmolekuláival.
Az IPTG szerepe a kutatásban és az iparban
Az IPTG kulcsfontosságú eszköz mind a kutatásban, mind a biotechnológiai iparban. A kutatás során lehetővé teszi a tudósok számára, hogy vizsgálják a fehérjék működését azáltal, hogy ellenőrzött módon túltermelődnek. A biotechnológiai iparban rekombináns fehérjék nagyüzemi előállítására használják terápiás és diagnosztikai célokra.
Azonban az IPTG hatását a transzláció utáni módosításra alaposan meg kell fontolni. Például, ha egy fehérjét terápiás felhasználásra szánnak, bármilyen abnormális poszttranszlációs módosulás befolyásolhatja annak biztonságosságát és hatékonyságát. Ezért a kutatóknak és az ipari szakembereknek optimalizálniuk kell az IPTG indukciós feltételeit, hogy minimalizálják ezeket a hatásokat.
Egyéb kapcsolódó reagensek
IPTG reagens beszállítóként szeretnék megemlíteni néhány további, a fehérjekutatáshoz kapcsolódó reagenst is. Lehet, hogy érdekelAmitriptilin-hidroklorid por CAS 549 - 18 - 8, amelyet egyes fehérje-kis molekula kölcsönhatásokkal kapcsolatos kutatásokban használnak.Cilengitideegy másik érdekes reagens, amely a fehérje-sejt kölcsönhatások tanulmányozására használható. ÉsProtoporfirin IX CAS 553 - 12 - 8fehérje-hem kölcsönhatásokban alkalmazható.
Következtetés és cselekvésre ösztönzés
Összefoglalva, az IPTG egy erős reagens, amely jelentős hatással van a fehérjék poszttranszlációs módosulására. Noha értékes eszköz a fehérje expressziójához, tisztában kell lennünk lehetséges hatásaival a transzláció utáni módosításra. Függetlenül attól, hogy Ön laboratóriumi kutató vagy a biotechnológiai ipar szakembere, ezeknek a hatásoknak a megértése elengedhetetlen a sikeres fehérjekutatáshoz és -termeléshez.
Ha szeretné megvásárolni a kiváló minőségű IPTG reagenst vagy az általam említett egyéb kapcsolódó reagenseket, forduljon bizalommal. Azért vagyunk itt, hogy a legjobb termékeket és támogatást nyújtsuk fehérjekutatási igényeihez.
Hivatkozások
Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K. és Walter, P. (2002). A sejt molekuláris biológiája. Garland Science.
Sambrook, J. és Russell, DW (2001). Molekuláris klónozás: Laboratóriumi kézikönyv. Cold Spring Harbor Laboratory Press.