IPTG (izopropil-β-D-1-tiogalaktopiranozid) poregy jól ismert induktor, amelyet széles körben használnak a molekuláris biológiában rekombináns fehérjék expressziójára gazdasejtekben, jellemzően E. coliban. Ebben a blogban megvizsgáljuk, hogy az IPTG por hogyan befolyásolja a fehérjék expresszióját a gazdasejtek különböző növekedési fázisaiban. Megbízható IPTG por beszállítóként mélyreható ismeretekkel rendelkezünk annak alkalmazásairól és hatásairól, és szívesen megosztjuk Önnel ezeket az információkat.
Termékkód: BM-2-5-133
Név: Iptg
CAS-szám: 367-93-1
MF: C9H18O5S
MW: 238,3
EINECS sz.: 206-703-0
Piac: Indonézia, Egyesült Királyság, Új-Zéland, Kanada stb.
Gyártó: BLOOM TECH Guangzhou Factory
Technológiai szolgáltatás: K+F Oszt.-4
Szállítás: Szállítás, mint egy másik, nem érzékeny kémiai vegyületnév.
Iptg port biztosítunk, kérjük, tekintse meg a következő webhelyet a részletes specifikációkért és a termékinformációkért.
Termék:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/api-researching-only/iptg-powder-cas-367-93-1.html
Az IPTG fehérjeexpresszióban betöltött szerepének megértése
Az IPTG az allolaktóz analógja, a laktóz metabolitja. Az E. coli lac operon rendszerében a lac represszor fehérje normál körülmények között az operátor régióhoz kötődik, megakadályozva a laktóz metabolizmusért felelős gének transzkripcióját. Amikor az IPTG jelen van, kötődik a lac-represszorhoz, konformációs változást okozva a represszorban, és elengedi a kezelőtől. Ez lehetővé teszi, hogy az RNS-polimeráz kötődjön a promoterhez, és elindítsa a célgének transzkripcióját, ami a megfelelő fehérjék expressziójához vezet.
A gazdasejtek különböző növekedési fázisai
A gazdasejtek, mint például az E. coli, több különböző növekedési fázison mennek keresztül: a késleltetési fázison, az exponenciális fázison, az állófázison és a halálozási fázison.
Lag fázis: Ez a kezdeti fázis, amikor a sejtek alkalmazkodnak az új környezethez. A sejtek metabolikusan aktívak, de nem osztódnak gyorsan. A növekedéshez szükséges enzimeket és összetevőket szintetizálják.
Exponenciális fázis: Ebben a fázisban a sejtek állandó és gyors ütemben osztódnak. A sejtek száma rendszeres időközönként megduplázódik. A sejtek metabolikus aktivitása magas szintű, és aktívan szintetizálják a fehérjéket és más sejtkomponenseket.
Álló fázis: Ahogy a tápanyagok kimerülnek és a salakanyagok felhalmozódnak, a növekedési ütem lelassul, és a keletkező új sejtek száma megegyezik az elpusztuló sejtek számával. A sejtpopuláció elér egy fennsíkot.
Halál fázis: A tápanyaghiány és a mérgező salakanyagok jelenléte miatt a haldokló sejtek száma meghaladja az új sejtek számát, a sejtpopuláció csökkenni kezd.
Az IPTG hatása a fehérjeexpresszióra különböző növekedési fázisokban
Lag fázis
Az IPTG hozzáadása a késleltetési fázisban nem biztos, hogy túl hatékony a fehérjeexpresszió szempontjából. Mivel a sejtek még az adaptációs szakaszban vannak, metabolikus gépezetük nem működik teljesen. A sejteknek időre van szükségük ahhoz, hogy alkalmazkodjanak az új környezethez, szintetizálják az alapvető enzimeket, és felépítsék a szükséges sejtkomponenseket. Az IPTG bevezetése ebben a szakaszban nem biztos, hogy a célgének hatékony transzkripciójához és transzlációjához vezet. Előfordulhat, hogy a sejtek nem rendelkeznek elegendő erőforrással vagy megfelelő szabályozó mechanizmussal ahhoz, hogy reagáljanak az induktorra.
Exponenciális fázis
Általában az exponenciális fázist tekintik az optimális időnek az IPTG hozzáadására a fehérje expressziójához. Ebben a fázisban a sejtek gyorsan növekednek, és metabolikus aktivitásuk magas. A riboszómák, az RNS-polimerázok és más transzlációs és transzkripciós mechanizmusok nagyon aktívak. Ha IPTG-t adunk hozzá, az gyorsan tud kötődni a lac-represszorhoz, lehetővé téve a célgének transzkripcióját. Ennek eredményeként viszonylag rövid idő alatt nagy mennyiségű célfehérje szintetizálható. Ezenkívül a sejtek elegendő energiával és erőforrással rendelkeznek a rekombináns fehérje szintézisének támogatásához.
Állófázis
Az IPTG hozzáadása az állófázis alatt korlátozott fehérjeexpressziót eredményezhet. Ebben a szakaszban a sejtek stressznek vannak kitéve a tápanyag kimerülése és a salakanyagok felhalmozódása miatt. A sejtek metabolikus aktivitása lecsökkent, és előfordulhat, hogy a sejtrendszer nem olyan hatékony, mint az exponenciális fázisban. Bár az IPTG továbbra is képes kötődni a lac-represszorhoz, és elindítani a transzkripciót, előfordulhat, hogy a sejtek nem rendelkeznek elegendő energiával vagy erőforrásokkal a célfehérje nagy mennyiségének előállításához. Ezen túlmenően, az expresszált fehérje stabilitását befolyásolhatják az állófázisban fellépő stresszviszonyok.
Halál fázis
Nem tanácsos IPTG hozzáadása a halál fázisában. A sejtek pusztulnak, anyagcsere-funkcióik súlyosan károsodnak. A sejtes gépezet tönkremegy, a fehérjék szintetizálásának képessége szinte nem létezik. Az IPTG hozzáadása ebben a szakaszban nem vezet jelentős fehérjeexpresszióhoz.
Az IPTG-indukált fehérje expresszió optimalizálása
A legjobb fehérjeexpressziós eredmények eléréséhez több tényezőt is figyelembe kell venni.
IPTG koncentráció: Az optimális IPTG koncentráció az adott gazdasejtektől és a célfehérjétől függ. A túl alacsony koncentráció nem feltétlenül indukálja teljes mértékben a célgén expresszióját, míg a túl magas koncentráció toxikus lehet a sejtekre, és befolyásolhatja azok növekedését és fehérjeszintézisét.
Indukciós idő: Az indukció időtartama is döntő szerepet játszik. A hosszabb indukciós idő magasabb fehérjehozamhoz vezethet, de növelheti a fehérje lebomlásának és a mérgező salakanyagok felhalmozódásának kockázatát is.
Növekedési feltételek: Az optimális növekedési feltételek, például a hőmérséklet, a pH és a tápanyag-elérhetőség fenntartása elengedhetetlen a hatékony fehérjeexpresszióhoz. Ezek a tényezők befolyásolhatják a gazdasejtek növekedési sebességét és metabolikus aktivitását.
Kapcsolódó termékek és alkalmazásaik
IPTG por beszállítóként más, kiváló minőségű vegyi termékeket is kínálunk kutatási célokra. Például,Filgotinib CAS 1206161-97-8egy olyan vegyület, amely potenciált mutatott a gyulladáscsökkentő kutatás területén.4-Bróm-trifenil-amin CAS 36809-26-4széles körben használják a szerves szintézisben és az anyagtudományban.10-HDA CAS 14113-05-4különféle biológiai tevékenységekkel rendelkezik, és a gyógyszerkutatás területén érdekelt.
Termékünk
Következtetés és cselekvésre ösztönzés
Összefoglalva, az IPTG-por hozzáadásának időzítése a gazdasejtek növekedési fázisában kulcsfontosságú a hatékony fehérjeexpresszió szempontjából. Az exponenciális fázis általában a legjobb időpont az indukcióhoz, míg az IPTG hozzáadása a késleltetési, stacionárius vagy halálos fázisban előfordulhat, hogy nem hoz kielégítő eredményt. Az IPTG koncentráció, az indukciós idő és a növekedési feltételek gondos optimalizálásával a kutatók magas szintű fehérje expressziót érhetnek el.
Ha felkeltette érdeklődését IPTG porunk vagy egyéb vegyi termékeink, kérjük, vegye fel velünk a kapcsolatot a beszerzéssel és a további megbeszéléssel kapcsolatban. Elkötelezettek vagyunk amellett, hogy kiváló minőségű termékeket és kiváló ügyfélszolgálatot biztosítsunk, hogy megfeleljünk az Ön kutatási igényeinek.
Hivatkozások
- Miller, JH (1972). Molekuláris genetikai kísérletek. Cold Spring Harbor Laboratórium.
- Sambrook, J. és Russell, DW (2001). Molekuláris klónozás: laboratóriumi kézikönyv. Cold Spring Harbor Laboratory Press.
- Studier, FW és Moffatt, BA (1986). Bakteriofág T7 RNS polimeráz alkalmazása klónozott gének szelektív magas szintű expressziójának irányítására. Journal of Molecular Biology, 189(1), 113-130.